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無創性產前診斷胎兒遺傳物質

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香港驗血條件
     首先,說明胎兒的存在下的DNA在母體血漿和血清。 無細胞DNA所提供的胎兒遺傳物質的新來源,無創性產前診斷。 他們開發了一種實時,定量的PCR聚合酶鏈反應(PCR)方法來測量的胎兒DNA的濃度和分析SRY ,一個單拷貝的Y染色體特異性序列,來量化基因組當量的每毫升血液 的數量當婦女攜帶男性胎兒。
  結果表明,在母體血漿的DNA的胎兒DNA中的第一個和第三個三個月的濃度分別為3.4%和6.2% 。 他們估計平均為25.4份每母體血漿樣本毫升胎兒DNA循環的早期妊娠。 他們還表明,分娩后,無細胞胎兒DNA從母體循環中清除 非常迅速,具有半衰期在分鐘(3)的順序。 因此,相對高濃度的胎兒無細胞的DNA表明,母體血漿用于診斷目的使用胎兒DNA時廣泛而耗時的胎兒DNA的富集程序就沒有必要。
  雖然胎兒無細胞的DNA分析的胎兒男女和恒河猴D狀況的產前診斷的潛力已被提出,產前診斷的準確性還沒有被描述。 如果胎兒男女可確定的,以測定X連鎖遺傳病侵入性操作的數目會減少。 本研究評估了使用從妊娠早期獲得母體血漿游離DNA胎兒鑒定診斷的準確性。
  母體血液樣品(10mL)中收集到含管的EDTA 離心30008在3小時內進行分離。 血漿轉移到普通的聚丙烯管中,并通過離心30008.再 次分離上清液收集到新管中并保存在-20℃下直到進一步處理。 DNA從1.5毫升使用根據“血液和??體液協議”稍加修改的QIAamp血液 迷你試劑盒(Qiagen)進行血漿樣品的提取。 DNA從柱中洗脫,用50微升的水。 雖然使用ABI PRISM 7700序列檢測儀(Applied Biosystems)對母體血漿的DNA分析實時定量PCR測定已報道一些研究者 ),我們使用了的LightCycler(Roche Diagnostics公司),其是DNA的定量的可靠方法。 在Y染色體特異性序列,DYS-14, 在男性胎兒被用作分子標記進行量化的胎兒細胞的DNA。 在PCR反應體系為DYS-14序列組成的擴增引物DYS 14-713F(5'-CAT  CCA CGT CCC 和DYS14-880R(5'-TTC CCC TTT GTTGTT葡萄糖耐量試驗,看有CCC CAA 和雙重標記的熒光探針DYS14-883T(5'-FAM-CGA AGC CGA GCT GCC CAT CA-TAMRA-3')。 的熒 光PCR反應按照制造商的在20微升反應體積與除從試劑組得到(的LightCycler-快速起動的DNA站長熒光探針和擴增引物的所有組分 的說明制備雜交 探頭; 羅氏診斷)。 所提取的血漿DNA(13.1微升)用作各反應的模板。 熱循環開始時,采用變性 在95℃下進行 10分鐘,接著變性的40個循環,在95℃下進行10秒,退火57 [度]下進行20秒,延伸72℃下進行20秒。 雄性存在于血漿樣品中的 DNA的拷貝數通過用的雄性基因組DNA的校準稀釋曲線進行比較來確定。
  該DYS14序列的拷貝通過用連續稀釋,男性基因組DNA的標準曲線比較來確定。 的關系是線性的時,閾值循環作圖對輸入目標量,后 者繪制在一個共同的對數刻度。 校準曲線的相關系數為0.956?1.000。 從DNA的提取,隨后通過定量PCR啟動系統的計算出的一天 到一天的CV為5.3%(N = 7)。 我們增加了男性DNA(6.6納克的全血DNA)的1000拷貝數到非妊娠婦女和提取后評價DNA回收的血漿 。 男性DNA的回收率平均為66.0%。
  從這些的孕婦的血漿樣品進行重新分析的結果相對應的正確的胎兒的性別。
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案例分享
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